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| 全预混冻干PCR试剂检测草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的研究 |
| 侯月娥，伍建敏，王凤求，赵玉林，张杰，王贵平，李中圣 |
| 广东海大集团股份有限公司，广东 广州 511400 |
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| Detection of Grass carp reovirus Ⅱ by Premixed Freeze-dried PCR |
| HOU Yue′e, WU Jianmin, WANG Fengqiu, ZHAO Yulin, ZHANG Jie, WANG Guiping, LI Zhongsheng |
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摘要 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一，目前在我国广泛流行。本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列，设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物，通过优化反应条件，建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。试验对反转录和PCR反应体系进行摸索，通过优化的冻干工艺制备出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型全预混RT-PCR试剂，在荧光定量PCR中，冻干试剂的检测灵敏度可达10个模板，是普通PCR的100倍。批次间变异系数小于4%。特异性试验结果表明，该方法可特异性地检出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型，而对鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死症病毒无检测信号。该冻干试剂4 ℃保存12个月，室温25 ℃保存3个月，37 ℃保存15 d，敏感性仍为10个，与第1 d相同；利用手持单通道荧光PCR仪，可在42 min内完成核酸诊断。本试验基于荧光定量PCR检测方法，结合核酸扩增体系冻干工艺制备的全预混草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型RT-PCR试剂具有耐保存便于运输、准确性高、仪器拓展性好的特点，对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型快速诊断有重要意义。
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| 关键词 ：
草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型,
冻干试剂,
TaqMan荧光定量RT-PCR
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| Key words：
Grass carp reovirus Ⅱ
lyophilized reagent
TaqMan real-time quantitative RT-PCR
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| 引用本文: |
侯月娥，伍建敏，王凤求，赵玉林，张杰，王贵平，李中圣. 全预混冻干PCR试剂检测草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的研究[J]. 水产科学, 2019, 38(1): 80-85.
HOU Yue′e, WU Jianmin, WANG Fengqiu, ZHAO Yulin, ZHANG Jie, WANG Guiping, LI Zhongsheng. Detection of Grass carp reovirus Ⅱ by Premixed Freeze-dried PCR. 水产科学, 2019, 38(1): 80-85.
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| 链接本文: |
| http://www.shchkx.com/CN/ 或 http://www.shchkx.com/CN/Y2019/V38/I1/80 |
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