黄鳝血清转铁蛋白多克隆抗体的制备及检测
雷华明，李伟
长江大学 湿地生态与农业利用教育部工程研究中心，湖北 荆州 434025
Preparation and Identification of Polyclonal Antibody of Serum Transferrin in Swamp Eel Monopterus albus
LEI Huaming, LI Wei
Engineering Research Center of Ecology and Agricultural Use of Wetland，Ministry of Education，Yangtze University, Jingzhou 434025, China
摘要 为实现黄鳝血清转铁蛋白基因的原核表达并制备其多克隆抗体，利用基因特异性引物从黄鳝肝脏cDNA中扩增黄鳝转铁蛋白的C端序列，亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，构建pET/Tf-C重组表达载体|转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导。利用Ni离子亲和层析技术纯化Tf-C蛋白，并免疫新西兰兔制备多克隆抗体；通过间接ELISA技术和组织蛋白印迹对制备的多克隆抗体进行检测。试验结果表明，成功构建pET/Tf-C原核表达载体，并实现了蛋白的表达和纯化|制备的多克隆抗体效价大于1∶25 600，并能特异性地识别来源于黄鳝不同组织的血清转铁蛋白。研究结果对黄鳝血清转铁蛋白功能的研究奠定了基础。
关键词 ：
黄鳝 ,
转铁蛋白 ,
多克隆抗体 ,
制备
Key words ：
Monopterus albus transferrin
polyclonal antibody
preparation
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